上海起发为InvivoGen国内代理商，美国InvivoGen Invivogen 主要提供抗生素，转染试剂，细胞因子，细胞系，质粒等产品。抗生素涵盖了细胞培养、筛选全系列，如Blasticidin S,Hygromycin B , Phleomycin, Primocin, Zeocin等细胞分选常用抗生素。尤其以抗细胞支原体污染的抗生素Plasmocin™zui为出名，该抗生素因其性能受到客户*。
品牌：Invivogen
货号：pcpgf-bas
品名：pCpGfree-basic with mSEAP reporter gene 带有mSEAP报道基因的pCpGfree-basic
规格：20 µg
pCpGfree-basic是*不含CpG二核苷酸的报道质粒。这些质粒缺乏完整的启动子区域（与pCpGfree质粒相比）。
pCpGfree-碱性质粒在mSEAP或Lucia（一种分泌型荧光素酶报告基因）上游含有多克隆位点（MCS）。报道基因在用该质粒转染的细胞中的表达取决于在报道基因上游插入功能性启动子或增强子/启动子盒。
因此，pCpGfree碱性质粒允许单独研究CpG甲基化对启动子的影响，或与增强子元件组合。
产品规格
•不含CpG的质粒骨架
•不含增强子/启动子区域的报告质粒：
- 鼠分泌的碱性磷酸酶（SEAP）
- 分泌型荧光素酶（Lucia）
•可在含Zeocin™的大肠杆菌中选择
本产品受限制使用许可（请参阅条款和条件）。
内容
•提供20μg作为冻干DNA的pCpGfree-碱性质粒
•将大肠杆菌 GT115菌株冻干在纸盘上
•4袋大肠杆菌 Fast- Media®Zeo（2 TB和2琼脂）
描述
质粒特征
在大肠杆菌中复制和选择质粒所需的所有元件和哺乳动物细胞中的基因表达*没有CpG二核苷酸。此外，所有Dam甲基化位点（GATC）已被去除以防止原核甲基化。
用于在大肠杆菌中表达的元件
•复制起点：大肠杆菌 R6K gamma ori已被修饰以去除所有CpG。该起源由pir基因编码的R6K特异性启动子蛋白π激活[1]。
•细菌启动子：EM2K是细菌EM7启动子的无CpG版本。
•选择标记：Zeocin™抗性基因是一个含有大量CpG二核苷酸的小基因（<400 bp）。一个合成的新等位基因被创建，不含CpGs。
用于在哺乳动物细胞中表达的元件
•合成的mSEAPΔCpG基因：通过化学合成构建的鼠SEAP基因的无CpG等位基因。
•聚腺苷酸化信号：聚腺苷酸化信号是晚期SV40聚腺苷酸化信号的无CpG形式。
MAR：基质连接区域（MAR）是典型的富含AT的序列，能够在独立调控的结构域之间形成屏障[2]。pCpGfree质粒含有来自人IFN-β基因或β珠蛋白基因的5'区域的两个MAR，因为它们天然不含CpG，所以被选择。MARs被放置在细菌和哺乳动物转录单位之间。
•MCS：多克隆位点包含几个常用的限制性位点，以方便克隆感兴趣的基因。5'Sda I，Bsp 120I，Avr II，Nsi I，Ppu 10I，Sca I，Bam HI，Spe I 3'
由于存在R6Kγ复制起点，pCpGfree-basic只能在表达pir突变基因的大肠杆菌突变株中扩增。它不会在标准大肠杆菌菌株中复制。因此，pCpGfree-basic与大肠杆菌 GT115菌株一起提供，该菌株也是Dcm甲基化缺陷的pir突变体。
1. Wu F.等人 1995.对R6Kγ-起源核心复制子赋予稳定维持的DNA片段。J Bacteriol。177（22）：6338-45。
2. Bode J.等，1996。支架/基质附着区：具有多种调节功能的拓扑开关。Crit Rev Eukaryot Gene Expr。图6（2-3）：115-38。
细节
基于pCpGfree的骨干
MCS： 5'-SdaI，Bsp120I，AvrII，NsiI，Ppu10I，ScaI，BamHI，SpeI，HindIII-3'
程序
1-将启动子和/或增强子片段插入pCpGfree-basic
2-用CpG甲基化酶（Sss I）或位点特异性甲基化酶（Hha I，Hpa II）处理重组质粒。
3-用甲基化酶处理或未处理的质粒瞬时转染细胞。
4-通过使用适当的检测试剂确定报告子表达来分析启动子CpG甲基化。
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