EZ-press Cell to cDNA Kit
产品概述
介绍
EZ-press 细胞到 cDNA 试剂盒提供了一种快速简便的方法，无需 RNA 分离即可从培养细胞中生产 cDNA。该试剂盒生成的cDNA适用于基因克隆和基因表达的定量分析，因此是TRIzol方法的良好替代品。
与TRIzol方法相比，该试剂盒具有以下几个显著优势：
1.易于使用。从培养的细胞开始，只需两个步骤（细胞裂解和逆转录）即可合成高质量的cDNA，无需RNA分离。
2.快速。整个实验（从细胞到cDNA）可以在不到35分钟的时间内完成。
3.稳定，可重复性强。在整个实验过程中，总RNA被完mei保留，从而获得稳定且高度可重复的结果。
4.灵敏度高。灵敏度高。每个样品的检测下限仅为100个细胞。
5. 没有基因组DNA残留。基因组DNA被充分去除。此外，该试剂盒中使用的试剂安全无毒，与臭味和危险的TRIzol试剂相比，这是令人愉快的。
细胞裂解液解冻细胞裂解
缓冲液，倒置或轻弹试管数次以彻di混合（不要使用涡旋），然后将试管放在冰上。
1A.对于细胞数小于3×105/样品的贴壁细胞：
a） 从孔中吸出培养基。
b）用PBS（200μl/孔）洗涤孔。在不干扰细胞的情况下尽可能完quan去除PBS。
c） 以 80 μl 细胞裂解缓冲液/1×105个细胞的比例向每个样品添加细胞裂解缓冲液（例如您应该将160ul细胞裂解缓冲液添加到2×105个细胞中），轻轻上下移液5次以裂解细胞。
d）将细胞裂解物在室温（19~27°C）下孵育5分钟。
1B.对于细胞数大于3×105/样品或悬浮细胞的贴壁细胞：
a）（仅适用于贴壁细胞，对于悬浮细胞，从步骤b开始）使用实验室常规采用的传代培养方法分离细胞。
b）计数然后轻轻沉淀细胞，丢弃生长培养基，并将细胞放在冰上。
c） 通过将细胞重悬于每 1×105个细胞的 ~0.1 mL PBS 中来洗涤 PBS 中的细胞。
d）将一定量的细胞（~1×105）转移到每个样品的新1.5ml Eppendorf管中，低速离心细胞，然后在不干扰细胞沉淀的情况下小心吸出PBS。将细胞放在冰上。
e）向每个样品中加入80μl细胞裂解缓冲液，轻轻上下移液5次以裂解细胞。
f）将细胞裂解物在室温（19~27°C）下孵育5分钟。
2.将裂解物放在冰上，在30分钟内进行RT反应。
注意：1.80μl细胞裂解缓冲液的容量约为1×105个细胞，根据细胞类型而变化。为了获得最佳结果，强烈建议进行试点实验以确定每次裂解的最佳细胞数。
2.在96、48、24和12孔细胞培养板中培养的细胞，细胞数不超过3×105，可在PBS洗涤后直接用于裂解。当处理超过3×105 /孔（或培养皿）的细胞时，请遵循程序1B：必须首先分离细胞（步骤a）。然后，将细胞培养基加入胰蛋白酶分离的细胞中，计数，低速离心并弃去上清液（步骤b），用适当体积的PBS重悬（步骤c），然后取~1×105个细胞/样品用80μl细胞裂解缓冲液裂解（步骤d）。
3.细胞裂解物与任何其他常用的RT试剂不相容（使用其他RT试剂无法产生或很少的cDNA）。因此，必须使用该试剂盒中提供的特殊优化的RT试剂对细胞裂解物进行逆转录。
反转录
按照产品手册中的说明进行逆转录。
采用6对引物（HEK-293T细胞）实时qPCR对EZBioscience®EZ-press细胞合成的cDNA对cDNA试剂盒和TRIzol -逆转录法合成的具有代表性的实验结果
进行了评估。如下图所示，EZ-press细胞转cDNA试剂盒与TRIzol -RT方法之间的结果高度一致，表明EZ-press细胞转cDNA试剂盒可以完quan替代TRIzol-RT方法从细胞制备cDNA。
产品详情
名称 EZ-press Cell to cDNA Kit
编号 B0001
品牌 ezbioscience
