Gene Link
提供的材料

储存条件：

接收后储存糖原和线性丙烯酰胺溶液at -20^oC 以及室温下的所有其他溶液。

检验报告和产品质量标准

DNA 和 RNA 沉淀溶液是所有分子生物学实验室的基本要求。Gene Link 使用无核酸酶水制备了一系列常见和流行的溶液，均为分子生物学级，也适用于 RNA 沉淀。

使用无核酸酶水制备糖原和线性丙烯酰胺溶液，并通过在 RNA 和 DNA 沉淀中使用核酸酶，随后进行琼脂糖凝胶电泳来检测是否存在核酸酶，以确定核酸的完整性和无分解。

在无核酸酶高压灭菌水中制备 LiCl、醋酸钠、醋酸钾和氯化钠的适当摩尔浓度溶液，制备后再次高压灭菌。在无核酸酶高压灭菌水中制备适当摩尔浓度的乙酸铵溶液。检测所有溶液的 DNA、RNA 和寡核苷酸沉淀。

经认证，所有溶液均不含核酸酶和核酸，并经验证可用于 DNA 和 RNA 沉淀。需要适当的无核酸酶处理、分配和储存条件。

在每个产品的标签和随附的装箱单上注明制造批号。

产品描述和应用

DNA 和 RNA 的沉淀

经典的分子生物学程序是乙醇沉淀浓缩 DNA、RNA 和寡核苷酸。变更为使用异丙醇。本产品手册仅限于与核酸的酒精沉淀相关的描述。另一种浓缩 DNA 和 RNA 的方法是使用硅胶珠或玻璃纤维过滤器，在离液盐存在的情况下优先结合 DNA 和 RNA。参见Omni-Clean™该方法详细信息的产品线。Omni-Clean™是从极稀溶液中浓缩 DNA 和 RNA，从凝胶切片中提取 DNA 和 RNA 的有效方法。

使用酒精进行 DNA 和 RNA 沉淀是基于在存在盐的情况下盐析的原理，使核酸优先变得不溶，并通过离心收集沉淀物。该工艺还纯化了 DNA 和 RNA，留下醇溶性盐、有机溶剂和洗涤剂。

由于磷酸二酯键的磷酸基团，DNA 和 RNA 的骨架带负电荷，因此水合，易溶于中性水。加入阳离子盐和乙醇或异丙醇可破坏水合物外壳，促进带负电荷的磷酸基团和带正电荷的离子之间形成离子键，有效中和 DNA 或 RNA 分子，导致沉淀。

乙醇与异丙醇

乙醇和异丙醇均用于核酸的沉淀。乙醇用于 DNA 和

1. -RNA 和异丙醇为 0.6 至 1 体积的 DNA 和 RNA 溶液，体积为 3。对于异丙醇，乙醇的终浓度在 60%-80% 和 30%-50% 之间变化。

异丙醇具有所需体积较小的优点，通常用于沉淀大量核酸溶液。通常，向 1 体积 DNA 溶液中加入 0.6 至 1 体积的异丙醇。较高的量对较小的 RNA 的片段有用。相比之下，2 体积乙醇是 DNA 的标准品，2.5 体积是 RNA 溶液的标准品。但是，与乙醇相比，异丙醇的缺点是共沉淀更多的盐，挥发性更低，并且风干缓慢，增加了酒精残留到终样品中的风险。

载体/共沉淀剂

通过标准乙醇沉淀法，在 100-200 ng/mL 浓度下，DNA 和 RNA 沉淀相当有效，并且通常在该浓度下也可见沉淀。低于 100 ng/mL 时通常无法实现定量沉淀，此外，沉淀不可见，因此难以完成乙醇沉淀。

传统上使用 tRNA 和糖原作为载体来帮助沉淀和颗粒的可见性。这两种物质均来自生物来源，因此含有痕量核酸，其使用需要广泛去除核酸和核酸酶。线性聚丙烯酰胺 (LPA) 是一种合成的惰性载体，因此不含核酸和核酸酶。

糖原和线性丙烯酰胺 (LPA) 对大多数分子生物学应用的抑制作用均极小，因此可以相当有信心地使用。

盐

乙醇沉淀中常用的盐是醋酸钠、乙酸铵、氯化钠和氯化锂。

3M 醋酸钠 ph5.2-5.5 溶液是大多数实验室核酸沉淀的标准试剂。下面列出了常用盐及一些属性。

冷却温度和时间

经典的冷却温度为-20 ℃10-15 min，当 DNA 浓度低于 100 ng 时，这可能是选，但通常没有必要，因为当 DNA 浓度不受限制时，沉淀发生非常迅速。

不同实验室的沉淀冷却时间不同，从-70 ℃、-20 ℃、0 ℃ 或室温，持续 5 min 至过夜。对于低 DNA 浓度，可能需要长达 20 min 的离心时间才能有效回收。

在较低温度下，酒精的粘度大大增加，可能需要离心更长时间才能有效沉淀 DNA。在-70 ℃ 孵育可提高小浓度或少量 DNA 的沉淀效率，但这些溶液应在离心前恢复至 0 ℃。

离心速度和时间

一般 12K rpm 离心 5-10 min 足以沉淀 DNA 和 RNA。较长的离心时间可有效回收低浓度核酸，但通常无需增加超过 20 min。

干燥

应注意在复溶前干燥沉淀的 DNA 和 RNA 以*蒸发乙醇或异丙醇。核酸不应过度干燥，应避免或在观察到的足以蒸发酒精的较短持续时间内进行加热加速真空。通常将管在工作台上保持打开几分钟就足够了。

RNA 的沉淀

RNA 沉淀通常与 DNA 相似，而应特别考虑无 RNase 处理和所有方法的性能。

选 RNA 复溶和储存溶液（1 mM 柠檬酸钠，pH 6.4；）[目录号：40-5014-16]

复溶

参见Gene Link DNA&RNA 重构液[目录号：40-3000-00]手册。

DNA&RNA 重构液包装内容物

目录号：40-5014-05 RNA 复溶溶液（1 mM 柠檬酸钠，pH 6.4）；50 mL 目录号：40-3000-05 DEPC 处理水；50 mL

目录号：40-3001-05 无核酸酶水（不含 DEPC）；50 mL 目录号：40-5011-05 TE 缓冲液 1X 溶液 pH 7.0；50 mL

载体/共沉淀剂

糖原

糖原溶液 10 mg/mL；目录号：40-5112-01

使用单价盐和乙醇或异丙醇进行有效的 DNA 和 RNA 沉淀取决于其浓度。浓度低于 50 ng/mL 时，DNA 和特异性 RNA 沉淀通常无法定量，沉淀不清晰可见，导致回收率不可靠。

添加糖原或线性丙烯酰胺作为载体/共沉淀剂有助于定量回收，特别是沉淀的清晰可见性。糖原不会干扰分光光度法读数、电泳和包括 PCR 在内的大多数分子生物学酶应用。

用途：1µL (10µg) 10 mg/mL 糖原溶液足以用于 500µL DNA 或 RNA 溶液。糖原来源：糖原是一种来源于牡蛎的高纯度多糖。

规格：分子生物学级。提供的糖原溶液经验证不含 DNase 和 RNase。糖原溶液可能含有残余核酸。

线性丙烯酰胺

线性丙烯酰胺溶液（线性聚丙烯酰胺，LPA；5 mg/mL）；目录号：40-5113-01

使用单价盐和乙醇或异丙醇进行有效的 DNA 和 RNA 沉淀取决于其浓度。浓度低于 50 ng/mL 时，DNA 和特异性 RNA 沉淀通常无法定量，沉淀不清晰可见，导致回收率不可靠。

添加线性丙烯酰胺作为载体/共沉淀剂有助于定量回收，尤其是颗粒的清晰可见性。线性丙烯酰胺不干扰分光光度法读数、电泳和包括 PCR 在内的大多数分子生物学酶应用。线性丙烯酰胺是合成的，保证不含所有核酸、dna 酶、rna 酶和蛋白酶。线性聚丙烯酰胺 [40-5113-01] 的平均分子量为 9-13 MDa。

用途：1-2µL (5-10µg) 5 mg/mL 线性丙烯酰胺 (LPA) 溶液足以用于 500µL DNA 或 RNA 溶液。线性聚丙烯酰胺颗粒未紧密粘附在微量离心管底部。去除上清液时，小心不要丢弃沉淀物。

线性丙烯酰胺 (LPA) 溶液来源：在无核酸酶分子生物学级水中制备的合成物。

规格：分子生物学级。提供的线性丙烯酰胺 (LPA) 溶液经验证不含 DNase、RNase、蛋白酶和核酸。线性聚丙烯酰胺 [40-5113-01] 的平均分子量为 9-13 MDa。

醋酸钠

3M 醋酸钠 pH 5.5 DNA&RNA 沉淀溶液；目录号：40-5132-05

醋酸钠可沉淀蛋白质，因此，如果溶液含有大量蛋白质，应避免使用。

用途：0.3 M 醋酸钠终浓度和 2-2.5 体积乙醇。

浓度≥20 ng/mL 时 DNA 或 RNA 的常规沉淀

1. 添加 1/10^th3 MpH 值醋酸钠的体积 5.5.
2. 加入 2 体积 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 体积 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 10 min。轻轻倒出或吸取上清液。
5. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下储存的 70% 乙醇。涡旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 3 min。轻轻倒出或吸取上清液。
7. 风干颗粒 5 min。
8. 在无核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重悬团块。
9. 选 RNA 复溶和储存溶液（1 mM 柠檬酸钠，pH 6.4；）[目录号：40-5014-16]

醋酸钾

3M 醋酸钾 pH 5.5 DNA&RNA 沉淀溶液；目录号：40-5133-50

1. 醋酸钾在 RNA 沉淀中特别有用，用于无细胞翻译，因为它避免了钠离子的加入。
2. 沉淀蛋白质，因此如果溶液含有大量蛋白质，应避免沉淀。
3. 避免与含 SDS 的 DNA 和 RNA 溶液一起使用。SDS 的钾盐极不溶。

用途：0.3 M 醋酸钾终浓度和 2-2.5 体积乙醇。

浓度≥20 ng/mL 时 DNA 或 RNA 的常规沉淀

1. 添加 1/10^th3 M 醋酸钾 pH 值的体积 5.5.
2. 加入 2 体积 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 体积 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 10 min。轻轻倒出或吸取上清液。
5. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下储存的 70% 乙醇。涡旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 3 min。轻轻倒出或吸取上清液。
7. 风干颗粒 5 min。
8. 在无核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重悬团块。
9. 选 RNA 复溶和储存溶液（1 mM 柠檬酸钠，pH 6.4；）[目录号：40-5014-16]

氯化钠

5M 氯化钠 DNA&RNA 沉淀；目录号：40-5134-05

1. 无需调节 pH 值。
2. 高洗涤剂含量溶液中的选盐。SDS 可溶于 70% 乙醇，确保无洗涤剂 DNA 沉淀。

用途：0.3 M 氯化钠终浓度和 2-2.5 体积乙醇浓度≥500 ng/mL 时 DNA 或 RNA 的常规沉淀

1. 加入 5M 氯化钠至终浓度 0.3M。
2. 加入 2 体积 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 体积 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 15 min。轻轻倒出或吸取上清液。
5. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下储存的 70% 乙醇。涡旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 3 min。轻轻倒出或吸取上清液。
7. 风干颗粒 5 min。
8. 在无核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重悬沉淀
9. 选 RNA 复溶和储存溶液（1 mM 柠檬酸钠，pH 6.4；）[目录号：40-5014-16]

乙酸铵：7.5M 醋酸铵 DNA&RNA 沉淀液；目录号：40-5135-05

1. 挥发性溶液，请勿高压灭菌。
2. 高 dNTP 和寡糖含量溶液中的选盐，因为这些物质仍保留在溶液中。
3. 如果作为铵离子的激酶化抑制多核苷酸激酶，则避免使用。
4. 2.5M 乙酸铵与乙醇沉淀 DNA，而碳水化合物和 dNTP 保留在溶液中。

用途：2.5 M 乙酸铵终浓度和 2.5 体积乙醇用于 RNA 浓度≥20 ng/mL 时 DNA 或 RNA 的常规沉淀

1. 加入 0.5 体积的 7.5 M 乙酸铵。涡旋。
2. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 15 min
3. 加入 2 体积 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 体积 100% 乙醇 (RNA)。
4. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 15 min。轻轻倒出或吸取上清液。
6. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下储存的 70% 乙醇。涡旋。
7. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 3 min。轻轻倒出或吸取上清液。
8. 风干颗粒 5 min。
9. 在无核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重悬团块。
10. 选 RNA 复溶和储存溶液（1 mM 柠檬酸钠，pH 6.4；）[目录号：40-5014-16]

乙酸铵：5M 醋酸铵 DNA&RNA 沉淀液；目录号：40-5136-05

1. 挥发性溶液，请勿高压灭菌。
2. 高 dNTP 和寡糖含量溶液中的选盐，因为这些物质仍保留在溶液中。
3. 如果作为铵离子的激酶化抑制多核苷酸激酶，则避免使用。
4. 2.5M 乙酸铵与乙醇沉淀 DNA，而碳水化合物和 dNTP 保留在溶液中。

用途：2.5 M 乙酸铵终浓度和 2.5 体积乙醇（用于 RNA）

浓度≥20 ng/mL 时 DNA 或 RNA 的常规沉淀

1. 加入 1 体积 5 M 乙酸铵。涡旋。
2. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 15 min
3. 加入 2 体积 100% 乙醇 (DNA) 或 2.5 体积 100% 乙醇 (RNA)。
4. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 15 min。轻轻倒出或吸取上清液。
6. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下储存的 70% 乙醇。涡旋。
7. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 3 min。轻轻倒出或吸取上清液。
8. 风干颗粒 5 min。
9. 在无核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重悬沉淀
10. 选 RNA 复溶和储存溶液（1 mM 柠檬酸钠，pH 6.4；）[目录号：40-5014-16]

LiCl RNA 沉淀溶液：(7.5M LiCl，50 mM EDTA pH 8.0)；目录号：40-5131-05

不得用于小于 300 个核苷酸的 RNA 的沉淀。

终浓度为 2.5M 的 LiCl 在不添加乙醇的情况下可有效沉淀大于 300 个核苷酸的 RNA，这种沉淀方法选择性沉淀 RNA，不能有效沉淀 DNA、蛋白质或碳水化合物 (Barlow et al.,1963)。它是去除 RNA 制剂中翻译或 cDNA 合成抑制剂的选方法 (Cathala et al.,1983)。同时为从体外转录反应中回收 RNA 提供了一种简单快速的方法。4 ℃、12K rpm 离心 20 min，可定量回收低至 50 ng 的 RNA。

用途：在不添加乙醇或异丙醇的情况下，对 2.5 M 氯化锂进行终浓缩。浓度≥100 ng/mL 时 RNA 的常规沉淀。

1. 加入 0.5 体积的 7.5 MLiCl。（请勿添加乙醇）
2. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
3. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 15 min。轻轻倒出或吸取上清液。
4. 向沉淀中加入 200µL-20 ℃ 下储存的 70% 乙醇。涡旋。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 离心至少 3 min。轻轻倒出或吸取上清液。
6. 风干颗粒 5 min。
7. 在无核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 或 1 mM 柠檬酸钠 pH 6.4 中重悬团块。
8. 选 RNA 复溶和储存溶液（1 mM 柠檬酸钠，pH 6.4；）[目录号：40-5014-16]

参考文献

1. Okayama,H.&Berg,P. (1982)摩尔细胞生物学2、161-170，高效克隆全长 cDNA。
2. Wallace,D.M. (1987)方法酶。152、41-48、核酸的沉淀。
3. Ausubel,F.A.,Brent,R.,Kingston,R.E.,Moore,D.D.,Seidman,J.G.,Smith,J.A.&Struhl,K. (eds.)（1995 年）当前分子生物学方案，第 15.3.1-4 页（增刊17）Greene Publishing&Wiley-Interscience,New York.
4. Saporito-Irwin,S.M.等人. (1997) 生物技术23，424-427，质粒 DNA 的制备方案，适用于哺乳动物细胞的转染。
5. Gaillard、C 和 F Strauss。“以线性聚丙烯酰胺为载体的 DNA 乙醇沉淀。”核酸研究18,no. 2（1990 年 1 月）:378.
6. Barlow,J J,A PMathias,R Williamson,and DB Gammack.“一种定量分离未降解高分子量核糖核酸的简单方法。”生物化学。生物物理学。共存研究13 (1963): 61-66.
7. Cathala,G 等人“完整、翻译活性核糖核酸的分离方法。”DNA2 (1983): 329-335.

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仅供研究使用。不适用于诊断或临床程序。

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