ALSTEM是一家位于湾区的早期生物技术公司，拥有快速扩展的产品和服务组合，为生物制药和学术机构提供服务。受到加利福尼亚干细胞研究承诺的启发，ALSTEM于2012年由具有iPS细胞重编程和基因组编辑技术专业知识的科学家创立。
描述
ViralBoost Reagent（500X）是一种新型的小分子混合物，可以增强病毒的产生，是一种功能强大，广泛适用于有效病毒包装的试剂。ViralBoost试剂在转录水平上稳定地调节病毒RNA包装，这可以增加逆转录病毒颗粒或慢病毒颗粒的产量高达10倍。易于使用的协议使ViralBoost Reagent非常适合各种规模的病毒包装。
图1.来自GFP逆转录病毒转导的HEK 293T细胞的流式细胞术数据，其在不存在和存在ViralBoost试剂的情况下包装。
图2.用GFP慢病毒转导的HEK 293T细胞，其与ViralBoost一起包装和不包装
产品名称 | ViralBoost |
目录 ＃ | VB100 |
尺寸 | 1毫升 |
运输 | 环境温度 |
储存和稳定性 | 储存在4°C。根据指示储存，本产品可稳定保存12个月。 |
质量控制 | 每批ViralBoost试剂在使用人胚胎肾293T细胞的转染试验中进行功能测试。 |
用法 | 用逆转录病毒或慢病毒包装质粒混合物转染人胚肾（HEK）293T细胞后6-14小时，用补充有10％热灭活的胎牛血清和0.5％青霉素 - 链霉素的新鲜DMEM培养基替换培养基，并添加将1/500体积的ViralBoost试剂加入一体积的新鲜培养基中，并在37℃下在CO2培养箱中继续培养。 |
限制使用 | 仅供研究使用。不得用于诊断或治疗程序。 |
ViralBoost Reagent是一种新型的小分子混合物，用于高滴度病毒的生产，是一种功能强大，广泛适用于有效病毒包装的试剂。它稳定地调节转录水平上的病毒RNA包装，这可以大大增加逆转录病毒颗粒或慢病毒颗粒的产量，多可达10倍。易于使用的协议使ViralBoost Reagent非常适合各种规模的病毒包装。
第1天：转染前一天，
1.用1x明胶涂布板/盘30分钟。吸出明胶，每100mm平板涂3-4~10×10 6 HEK 293T细胞。每块板使用10毫升培养基。
注意：良好的单细胞悬浮液（胰蛋白酶消化良好）和均匀分布细胞非常重要。
第2天：转染
注意：按照制造商的协议准备转染。
2.准备两个试管，并在每个试管中加入0.5 ml DMEM。在一个试管中，加入DNA混合物（含有病毒载体和包装混合物）并通过标记管充分混合。在另一个试管中，添加NanoFect（目录号NF100）。通过标记管混合。
注意：在室温（20-25°C）下孵育不超过5分钟。
3.将NanoFect-DMEM混合物转移到DNA管中，上下移液2-3次。通过涡旋混合5-10秒充分混合。
4.在室温下孵育约15分钟，以允许NanoFect / DNA复合物自组装。
5.将NanoFect / DNA混合物逐滴添加到板上，轻轻摇动板并将板放回培养箱中
第3天：更改培养基并添加ViralBoost
6.用10ml新鲜培养基替换上清液，并补充20μlViralBoost（500X）。将平板放回细胞培养箱中。
第4天：收集病毒
！小心小心处理病毒材料并避免溢出。使用漂白剂净化有害液体（10％终浓度30分钟）。
7.将上清液收集在50ml锥形管中并置于冰上。将上清液以1,000g离心10分钟以除去细胞碎片。（将离心机预设为4°C）
8.通过0.45μm过滤器过滤上清液。将过滤的上清液转移至无菌容器中，并向每4体积含病毒的上清液中加入1体积的冷逆转录病毒/慢病毒沉淀溶液（4℃，目录号VC100和VC200）。（例如：5ml逆转录病毒/慢病毒沉淀溶液，含20ml病毒上清液）。
9.充分混合并冷藏过夜。
第5天：浓缩病毒
10.在4℃下以1500g离心混合物30分钟。离心后，病毒颗粒可能在容器底部显示为米色或白色颗粒。
11.丢弃上清液。通过以1500g离心5分钟来旋转残留溶液。通过抽吸去除所有的液体痕迹，小心不要打扰颗粒中沉淀的病毒颗粒。
12.使用冷的无菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始体积重悬病毒颗粒。在低温小瓶中等分并储存在-80°C直至准备使用。
注意：可以使用病毒浓缩/纯化程序去除ViralBoost Reagent。当直接用于转导HEK 293T细胞时，尚未检测到具有ViralBoost试剂的粗病毒颗粒对目的基因表达的副作用，但是从细胞系到细胞系可能是不同的。建议事先测试ViralBoost对靶细胞的影响。
货号 | 品名 | 规格 | 品牌 |
VB100 | ViralBoost | 1毫升 | alstembio |
VC100 | 慢病毒沉淀解决方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
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